產品簡介：

血紅蛋白(Hemoglobin，Hb 或 HGB)是高等生物體內負責運載氧的一種蛋白質，是能使血液呈紅色的蛋白，血紅蛋白由四條鏈組成，兩條α鏈和兩條β鏈，每一條鏈有一個包含一個鐵原子的環狀血紅素，Hb 在氧含量高的區域容易與氧結合，在氧含量低的區域又容易與氧分離，血紅蛋白的這一特性，使紅細胞具有運輸氧的功能，血管溶血時血漿游離血紅蛋白(free hemoglobin)濃度增高。

 游離血紅蛋白檢測試劑盒( 鄰聯甲苯胺比色法)(Free Hemoglobin Colorimetric Assay Kit)檢測原理是血紅蛋白中亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的作用，可在氧化劑的作用下催化鄰聯甲苯胺(O-tolidine)產生青色或藍色產物，吸收峰在 630nm；在酸性條件下產物呈黃色，吸收峰在 435nm，產物黃色越深，說明 FHB 含量越高，反之越低； 通過分光光度比色法測定 435nm 處吸光度，就可計算出血漿游離血紅蛋白含量，主要用于血漿樣本，亦可用于測定細胞或組織的裂解液或勻漿液等樣品中游離血紅蛋白含量。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產品組成： 

自備材料：

1、96 孔板、酶標儀或分光光度計

2、生理鹽水或蒸餾水

操作步驟(僅供參考)：

1、準備樣品：

①血漿、尿液樣品：血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，尿液通    常也可以直接用于測定，獲得的樣品-20℃凍存備用。

②細胞或組織樣品：取恰當的細胞或組織裂解液，如果有必要需進行適當勻漿，低速離心取

上清，獲得的樣品-20℃凍存備用。

2、配制 Hb 標準品工作液：取 Hb(1mg/ml) 10μl 加入 90μl 生理鹽水，即為標準品工作液(100μg/ml)。

3、FHB 加樣：取 96 孔板或 EP 管，按照下表設置空白孔/管、標準孔/管、測定孔/管，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡；如果樣品中的血紅蛋白含量過低，可以增加    各管用量(0.02 增加到 0.1 或其他用量，保證各管體積一致即可）；如果樣品中的血紅蛋白含量過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測最好能設置平行孔/管， 尤其是標準品應作 3 復孔/管。

4、FHB 測定：空白調零，以分光光度計測定 435nm 處標準孔/管和測定孔/管的吸光度， 如果無法檢測 435nm，亦可檢測 425～450nm 范圍內吸光度。

 計算結果：

血漿游離血紅蛋白(mg/L)=測定吸光度/標準吸光度×100(mg/L)，一般＜40mg/ml

 注意事項：

1、 Hb(1mg/ml)為市售的牛血紅蛋白與生理鹽水配制而成的，未用 HiCN 標定其濃度，可能有一定誤差，有特殊需求的可以自備相關標準品。

2、 Hb(1mg/ml)和標準品工作液(100μg/ml)均應 4℃保存，同時應避免污染。

3、 也可用酶標儀測定，但應根據酶標儀的最大檢測體積進行調整。

4、 本反應比較快，加入 Acid Assay Buffer 和蒸餾水后應立即檢測，一般 30min 內顏色變化不大，但應保證不同批次實驗用相同的檢測時間。

5、 O-tolidine Solution 和 Acid Assay Buffer 有一定腐蝕性，請小心操作，避免直接接觸身體。

6、 氧化劑含有少量的過氧化氫，使用后應及時擰緊瓶蓋，如果反應不變化，可考慮重新配制本氧化劑溶液(0.05%水溶液即可）。

7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。