兔ELISA試劑盒運用雙抗體夾心ELISA法定量測定兔血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養、上清液和其他生物液體中兔血管緊張素轉化酶(ACE)ELISA試劑盒含量。

　　將兔血管緊張素轉化酶(ACE)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的兔血管緊張索轉化酶(ACE)與連接于固相載體上的抗體結合，然后加入生物素化的兔血管緊張索轉化酶(ACE)抗體，將未結合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標記的親和素，再次洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成黃顏色。顏色的深淺和樣品中的兔血管緊張索轉化酶(ACE)呈正相關。用酶標儀在450m波長下測定吸光度(0.D.值)，計算樣品濃度。

　　兔ELISA試劑盒的洗滌方法：

　　1、自動洗板機：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

　　2、手工洗板：甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

　　3、加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

　　4、棄去液體，甩干，每個孔中加入DetectionAb工作液100μl(在使用前15分鐘內配制)，酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。

　　5、棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。

　　6、每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

　　7、棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

　　8、每孔加底物溶液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據實際顯色酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當標準孔出現明顯梯度時，即可終止)。

　　9、每孔加終止液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃顏色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。

　　10、立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。

　　11、實驗完畢后將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。