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HPC-Y5細(xì)胞;人胰腺細(xì)胞說明書

更新時間:2021-04-06點(diǎn)擊次數(shù):885
  • 產(chǎn)品名稱: HPC-Y5細(xì)胞;人胰腺細(xì)胞
  • 細(xì)胞數(shù)量: 1*10^6
  • 組織來源: 胰腺
  • 細(xì)胞種屬: 人源
  • 生長特性: 貼壁
  • 培養(yǎng)基: MEM-EBSS
  • 形態(tài)特征: 形態(tài)上皮
  • 傳代方法: 1:3傳代,3-4天傳1次
  • 培養(yǎng)條件: 胎牛血清至最終濃度為10%。環(huán)境:空氣,95%;二氧化碳(CO2),5%;溫度,37℃
  • 細(xì)胞描述: 該細(xì)胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
  • 細(xì)胞凍存: 液氮凍存(凍存液基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO)
  • 細(xì)胞運(yùn)輸: 干冰運(yùn)輸(2ml凍存管)或活細(xì)胞運(yùn)輸(T25瓶)
注意事項
凍存細(xì)胞接收后的處理:
1.干冰運(yùn)輸,收到細(xì)胞后立即轉(zhuǎn)入-80℃冰箱短暫中轉(zhuǎn)或直接復(fù)蘇;
2.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)*揮發(fā)、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯(lián)系。
復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理:
1.收到細(xì)胞后,請首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液,培養(yǎng)液是否混濁,如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請立即拍照把圖片發(fā)給我們。
2.75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置4-6h后,在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片,若有貼壁細(xì)胞脫落,可收集上清離心,將沉淀用新的培養(yǎng)基接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。
3.建議收到當(dāng)天不要消化處理,如果細(xì)胞長滿90%,可選擇傳代處理。
4.如您收到細(xì)胞3天內(nèi)沒有反饋相關(guān)問題,出現(xiàn)的細(xì)胞問題將不提供免費(fèi)重發(fā)服務(wù)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
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