在ELISA試劑盒測定中試劑的準備zui為關鍵的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20min以上后，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應步驟中，能使反應微孔內的溫度較快地達到所要求的高度，以滿足測定要求。其次，目前的商品elisa試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。

　　此外，當試劑盒以OPD為底物時，則底物溶液應在反應顯色前臨時配制。

　　一、方法學的影響

　　ELISA測定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法（HBeAb,HBcAb等采用）因受操作時差所引起的競爭等因素的影響，結果重復性較差，質量較難控制。

　　二、試劑因素

　　不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質量*一致，即使是通過批批檢的項目其檢測結果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。嚴格執行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質控體系及重新評估試劑的復雜過程，并且能夠保證結果的穩定性；對于效期短、使用率低的試劑，應當小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復凍融造成試劑的失效。

　　三、樣本因素

　　標本干擾因素包括內源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等，后者包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長、標本凝固不全、冷凍標本的反復凍融等。

　　四、ELISA試劑盒操作因素對ELISA結果的影響

　　ELISA操作步驟復雜，操作不當將引起較大的誤差。ELISA試劑盒操作步驟有1.加樣2.溫育3.洗滌4.顯色5.比色這些過程中但凡一個步驟不小心都會影響到ELISA試劑盒檢測的質量。