土壤纖維素酶（Solid-cellulase，S-CL）活性測(cè)定試劑盒說明書

分光光度法 50管/24樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

S-CL主要來源于土壤微生物，S-CL催化農(nóng)作物秸稈產(chǎn)生的葡萄糖是主要的碳源營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

測(cè)定原理：

采用蒽酮比色法測(cè)定S-CL催化纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯、硫酸（不允許快遞）

和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：甲苯10mL×1 瓶，4℃保存；（自備）

試劑二：液體6mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體40mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存； 臨用前加入5mL 蒸餾水和45mL 濃硫酸充分溶解待用。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37 度烘箱風(fēng)干，過30~50 目篩。

加樣表和測(cè)定步驟：

對(duì)照管 測(cè)定管

風(fēng)干土樣（g） 0.1 0.1

試劑一 (μL) 100 100

振蕩混勻15min

試劑二（μL ） 180

試劑三（μL ） 740 740

蒸餾水（μL ） 360 180

37℃振蕩反應(yīng)3h 后，90℃水浴15min（蓋緊，防止水分散失）,冷卻后

8000g 25℃離心10min，取上清，得糖化液

糖化液 (μL) 350 350

試劑四 (μL) 650 650

混勻， 90℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，620nm 處蒸餾水調(diào)零，測(cè)定吸光值

A，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

S-CL 活力計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

單位的定義：每天每g 土樣中產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

S-CL 活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)

T：反應(yīng)時(shí)間，3h=1/8d； V 反總：反應(yīng)體系總體積：1.2mL；W：樣本質(zhì)量，0.1g。